Rekombinantni proteinski antigeni često imaju nekoliko različitih epitopa, od kojih su neki sekvencijski epitopi, a neki su strukturni epitopi.Poliklonska protutijela dobivena imunizacijom životinja denaturiranim antigenima mješavine su protutijela specifičnih za pojedinačne epitope i općenito se mogu koristiti za otkrivanje prirodnih struktura ili denaturiranih ciljnih proteina.Dodatna prednost korištenja denaturiranih proteina kao imunogena je ta da su denaturirani proteini skloniji biti imunogeniji i mogu stimulirati snažan imunološki odgovor kod životinja.
Sustav ekspresije bakterije Escherichia coli obično se bira za antigene svrhe jer je to najskuplji sustav u smislu vremena i novca.Kako bi se poboljšala mogućnost ekspresije ciljnog proteina i pogodnost pročišćavanja, ponekad se eksprimira samo mali fragment ciljnog proteina, kao što je specifična domena.
Trodimenzionalna struktura proteina
Specifična domena proteina
Ako je svrha pripreme antitijela isključivo detekcija wb, ekonomično je i brzo koristiti sintetski mali peptid kao antigen, ali postoji rizik slabe imunogenosti ili neregenosti zbog neprikladnog odabira peptidnog segmenta.Budući da priprema protutijela zahtijeva dugo razdoblje, dva ili tri različita peptidna segmenta često se odabiru za pripremu protutijela pomoću polipeptidnog antigena kako bi se osigurala stopa uspjeha eksperimenta.
Čistoća polipeptidnog antigena za imunizaciju mora biti veća od 80%.Iako se većom čistoćom teoretski mogu dobiti antitijela s boljom specifičnošću, u praksi životinje uvijek proizvode veliki broj nespecifičnih antitijela, čime se prikrivaju prednosti čistoće antigena.
Osim toga, pripravak antitijela iz malih peptida mora biti umrežen s odgovarajućim antigenom nosačem kako bi se povećala njegova imunogenost.Dva uobičajena nositelja antigena su KLH i BSA.
Vrijeme objave: 23. ožujka 2023