Najskloniji HPLC kvarovima i rješenjima

Kao instrument visoke preciznosti, HPLC može lako dovesti do problematičnih malih problema ako se njime ne upravlja na ispravan način tijekom uporabe.Jedan od najčešćih problema je problem kompresije stupca.Kako brzo otkloniti kvar na kromatografu.HPLC sustav se uglavnom sastoji od boce spremnika, pumpe, injektora, kolone, temperaturne komore kolone, detektora i sustava za obradu podataka.Za cijeli sustav, stupovi, pumpe i detektori su ključne komponente i glavne lokacije koje su sklone problemima.

Ključ tlaka u koloni je područje na koje treba obratiti posebnu pažnju kada se koristi HPLC.Stabilnost tlaka u stupcu usko je povezana s kromatografskim vršnim oblikom, učinkovitošću stupca, učinkovitošću odvajanja i vremenom zadržavanja.Stabilnost tlaka u stupcu ne znači da je vrijednost tlaka stabilna na stabilnoj vrijednosti, već da je raspon fluktuacije tlaka između 345 kPa ili 50 PSI (dopuštajući korištenje gradijentnog eluiranja kada je tlak u stupcu stabilan i polako se mijenja).Previsok ili prenizak tlak je problem tlaka u stupcu.

Najskloniji HPLC kvarovima i rješenjima

1, visoki tlak je najčešći problem u korištenju HPLC-a.To znači nagli porast tlaka.Općenito, postoje sljedeći razlozi: (1) Općenito, to je zbog začepljenja kanala protoka.U ovom trenutku, trebali bismo ga ispitati pojedinačno.a.Najprije odrežite ulaz vakuumske pumpe.U tom je trenutku PEEK cijev napunjena tekućinom tako da je PEEK cijev bila manja od boce s otapalom kako bi se vidjelo kaplje li tekućina po želji.Ako tekućina ne kaplje ili kaplje sporo, glava filtra otapala je začepljena.Tretman: Namočite u 30% dušičnu kiselinu pola sata i isperite ultra čistom vodom.Ako tekućina nasumično kaplje, glava filtra otapala je normalna i provjerava se;b.Otvorite ventil za pročišćavanje tako da mobilna faza ne prolazi kroz kolonu, a ako se tlak značajno ne smanji, bijela glava filtera je blokirana.Liječenje: Filtrirane bijele točke su uklonjene i sonicirane s 10% izopropanolom pola sata.Pod pretpostavkom da tlak padne ispod 100PSI, filtrirana bijela glava je normalna i provjerava se;c.Uklonite izlazni kraj kolone, ako se tlak ne smanji, kolona je blokirana.Liječenje: Ako se radi o blokadi puferske soli, ispirajte 95% dok se tlak ne normalizira.Ako je zapreka uzrokovana nekim bolje očuvanim materijalom, treba koristiti jači protok od sadašnje pokretne faze kako bi se požurio prema normalnom tlaku.Ako se dugotrajni tlak čišćenja ne smanji u skladu s gornjom metodom, može se smatrati da su ulaz i izlaz kolone povezani s instrumentom naprotiv, a kolona se može očistiti mobilnom fazom.U ovom trenutku, ako se tlak stupca još uvijek ne smanji, ulazna sitasta ploča stupca može se samo zamijeniti, ali kada rad nije dobar, lako je dovesti do smanjenja učinka stupca, pa pokušajte koristiti manje.Za teške probleme može se razmotriti zamjena stupca.

(2) Netočna postavka brzine protoka: Ispravna brzina protoka može se resetirati.

(3) Netočan omjer protoka: indeks viskoznosti različitih omjera protoka je različit, a odgovarajući tlak u sustavu protoka s većom viskoznošću također je veći.Ako je moguće, otapala nižeg viskoziteta mogu se zamijeniti ili ponovno postaviti i pripremiti.

(4) Klizanje nule tlaka sustava: podesite nulu senzora razine tekućine.

2, tlak je prenizak (1) obično je uzrokovan curenjem sustava.Što učiniti: Pronađite svaki spoj, posebno sučelje na oba kraja stupa, i zategnite područje curenja.Uklonite stup i zategnite ili obložite PTFE foliju odgovarajućom snagom.

(2) Plin ulazi u pumpu, ali tlak je obično nestabilan u ovom trenutku, visok ili nizak.Još ozbiljnije, pumpa neće moći apsorbirati tekućinu.Metoda obrade: otvorite ventil za čišćenje i čistite brzinom protoka od 3~5 ml/min.Ako nije, mjehurići zraka su aspirirani na ispušnom ventilu pomoću namjenske iglene cijevi.

(3) Nema otjecanja mobilne faze: provjerite postoji li mobilna faza u boci spremnika, je li sudoper uronjen u mobilnu fazu i radi li crpka.

(4) Referentni ventil nije zatvoren: referentni ventil je zatvoren nakon usporavanja.Obično se spušta na 0,1.~ 0,2 ml/min nakon zatvaranja referentnog ventila.

Sažetak:

U ovom radu analizirani su samo uobičajeni problemi u tekućinskoj kromatografiji.Naravno, u našoj praktičnoj primjeni naići ćemo na više drugih problema.U rješavanju grešaka trebali bismo slijediti sljedeća načela: mijenjati samo jedan po jedan čimbenik kako bismo odredili odnos između hipotetskog čimbenika i problema;Općenito, kada mijenjamo dijelove za rješavanje problema, trebali bismo obratiti pozornost na vraćanje rastavljenih netaknutih dijelova na mjesto kako bismo spriječili otpad;Stvaranje dobre navike vođenja evidencije ključ je uspjeha rješavanja grešaka.Zaključno, kada koristite HPLC, važno je obratiti pozornost na prethodnu obradu uzorka te pravilan rad i održavanje opreme.